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泛亚电竞app下载利用赛多利斯Octet分子互作分析系统和生物传感器提升AAV定量效率

更新时间:2024-06-04点击次数:

  腺相关病毒(Adeno-associated viruses, AAV)作为一种基因递送工具,具有以下优点:安全性好、免疫原性低、能够感染分裂和非分裂细胞,并能介导基因的长期稳定表达。因此,AAV是目前基因治疗中的首选载体,包括天然型(AAV)和重组型(rAAV)等多种血清型。常用的AAV血清型有AAV1、2、5、6、7、8、9和rh10等泛亚电竞app下载,不同的AAV血清型具有不同的衣壳蛋白空间结构,并由于其组织特异性(或亲嗜性)不同而被广泛应用。

  2022年5月,国家药监局药审中心发布了《体内基因治疗产品药学研究与评价技术指导原则(试行)》通告,指出病毒颗粒数是重要的质量分析指标之一。全新推出的Octet分子互作仪 AAVX腺相关病毒定量生物传感器,有效消除了目前定量方法中通量低、成本高、耗时长的技术瓶颈。一键解锁各类血清学AAV病毒衣壳定量,极大地提高了分析的效率和并降低成本。

  1. 为了提高AAV病毒载体的质量和产品,需要在多个工艺步骤中快速定量AAV浓度,以高效优化生产工艺。

  3. 时效性差且流程复杂。客户需要将样品送至分析部门或实验室检测,通常需要等待2到5天才能得到结果。这使得客户需等待结果后才能进行下一步工作或优化调整工艺流程。

  基于药典认可的生物层干涉(BLI)技术,赛多利斯Octet生物传感器R8/RH16/RH96高通量分子互作平台可以在5分钟内一次性检测8、16或96个样品。AAVX生物传感器可一步法直接定量纯化或粗样品,适用于各种血清型(AAV1至AAV9及AAVrh10)。其线 vp/mL。传感器可再生重复使用约20次,降低单个样品检测成本。Octet分子互作仪BLI Discovery v.13.0.1软件预设了AAV定量模板。

  大多数血清型的动态范围在8.5x108至1.0x1013 vp/mL之间,线个数量级,无论高滴度和低滴度样品都能得到准确测量。且动态范围内测试的所有浓度均观察到良好的回收率 (80–120%) 和精密度 (CV10%)。

  AAV的整个生产流程会用到不同的缓冲液和培养基基质,Octet对纯化样品和粗制样品均表现出优异的处理能力。使用样品稀释剂缓冲液对粗样品进行4倍至10倍稀释,即可显著减轻样品中基质效应。

  Octet BLI搭配AAVX传感器可以实现快速的检测设置、分析和实时数据显示,从而能够监控和优化每个检测步骤。为了证实Octet AAVX检测法和ELISA之间的相关性,来自BridgeBio Pharma和REGENXBIO公司的研究人员在AAV生物工艺流程的不同步骤测试了样品中的不同AAV血清型。

  图7. 使用Octet AAVX生物传感器和ELISA定量检测纯化样品及粗制样品(生物工艺中间体)中的AAV8和AAV9,数据显示两种方法具有良好的相关性。数据由REGENXBIO Inc.提供。

  基于Octet BLI分子互作分析系统 和Octet AAVX 生物传感器的AAV定量检测策略可广泛应用于AAV 上游和下游工艺各阶段,优化传统终点法耗时费力的确定,提供可靠、准确且便捷的AAV定量新思路。